Волчаночные клетки

LE-клетки

LE-клетки – тип лейкоцитов, которые разрушены особым иммуноглобулином (LE-фактором). Являются маркерами аутоиммунных заболеваний. Данный показатель имеет самостоятельное диагностическое значение. Выявление LE-клеток необходимо для диагностики системной красной волчанки и контроля эффективности лечения этого заболевания. Второстепенное значение анализ имеет при ревматоидном артрите, дерматомиозите, системной склеродермии. Забор крови для исследования производится из вен. Самый распространенный метод обнаружения LE-клеток – иммунохемилюминесценция (разновидность ИФА). В норме результат анализа отрицательный. Готовность результатов теста составляет 2-3 рабочих дня.

LE-клетки представляют собой нейтрофильные лейкоциты, которые содержат разрушенные ядра других лейкоцитов, погибших при взаимодействии с LE-фактором. В клинической практике их обнаружение в крови относят к признакам . Данное заболевание является аутоиммунным, то есть, патогенетический механизм заключается в выработке аутоантител – специфических белков, которые атакуют ткани и клетки в собственном организме. При СКВ повреждается соединительная ткань и сосуды. Хроматин из разрушенных ядер фагоцитируется нейтрофилами – так появляются LE-клетки. В них собственное функционирующее ядро оттеснено, центральную часть занимает материал погибшего нейтрофила.

LE-клетки формируются при участии LE-фактора. Этот иммуноглобулин образуется в организме при системной красной волчанке и обнаруживается в различных биологических жидкостях, в число которых входит кровь, пунктат костного мозга, экссудаты, моча. Иногда LE-клетки в небольшом количестве выявляются при других аутоиммунных заболеваниях, например, при или . Биоматериалом для проведения анализа является цельная кровь из вены. Уровень LE-клеток определяется хемилюминесцентным методом или методом Цинкхома-Конли. Исследование высокоспецифическое, поэтому имеет узкую область применения. Чаще всего оно используется в общетерапевтической практике и ревматологии .

Показания к сдаче анализа

Анализ на LE-клетки в крови – один из специфических тестов, выявляющих системную красную волчанку. Исследование показано для диагностики этого заболевания и отслеживания эффективности терапии. Результаты позволяют определить СКВ, а также установить стадию патологического процесса, его активность. При хорошем ответе на лечение уровень LE-клеток в крови снижается, нередко – до нулевых значений. Для диагностики других системных заболеваний анализ крови на LE-клетки не показан, так как повышение показателей определяется у небольшой части пациентов и является нестабильным.

Стоит помнить, что отрицательный результат анализа крови на LE-клетки не исключает наличия системной красной волчанки. Чаще всего показатели повышены в начале заболевания и при его обострении, а в периоды ремиссии они соответствуют норме. В остром периоде СКВ LE-клетки обнаруживаются у 40-95% пациентов. Анализ дополняется определением волчаночных клеток и скоплений нейтрофилов вокруг них, исследованием свободного ядерного вещества (гематоксилиновых телец, телец Харгрейвса). В настоящее время тест на LE-клетки все реже используется в клинической практике, его заменяют исследования антинуклеарных антител в крови и генетические методы. Они отличаются большей чувствительностью и точностью. Преимуществом теста на LE-клетки является его распространенность и экономичность процедуры анализа.

Подготовка к анализу и забор материала

Для теста на LE-клетки забор крови выполняется утром, до приема пищи. Подготовка к процедуре стандартна: за сутки следует отказаться от употребления алкоголя, выполнения тяжелой физической работы, последние полчаса нужно не курить, провести в спокойной обстановке. Кровь берется из локтевой вены методом пункции. Чтобы она не сворачивалась, и не изменялись ее свойства, в пробирку добавляется антикоагулянт (этилендиаминуксусная кислота). Емкость заполняется кровью наполовину, затем осторожно перемешивается и наполняется до отметки. Транспортировка в лабораторию осуществляется в специальных боксах, предохраняющих от перепада температур и сотрясений – факторов, способных повредить LE-клетки и другие форменные элементы.

Для определения LE-клеток в крови существует несколько методов, в настоящее время наиболее распространен иммунохемилюминесцентный анализ, в некоторых лабораториях используется метод Цинкхома-Конли в модификации Е. Н. Новоселовой. В основе ИХЛА лежит реакция между исследуемыми клетками и специфическим веществом, образующим с этими клетками комплексы «антиген-антитело». Последние связываются с ферментом, затем к смеси добавляется реагент, который окрашивает меченые комплексы. По оптической плотности образца определяется наличие и концентрация LE-клеток. Метод Цинкхома-Конли в модификации Е. Н. Новоселовой заключается в механическом воздействии на кровь, что облегчает появление LE-феномена. Кровь смешивается с оксалатом натрия и отстаивается при комнатной температуре в течение часа. Затем в пробирку вносятся стеклянные бусины, она плотно закрывается и интенсивно встряхивается. Через час отстоя биоматериал разделяется на слои, плазма помещается в центрифугу, из образовавшегося остатка выполняются мазки, их окрашивают и исследуют под микроскопом. Подготовка результатов анализа на LE-клетки занимает до 3 рабочих дней.

Нормальные значения

В норме данные анализа отрицательные. Если при микроскопии мазка определяется две и более LE-клетки на 100 лейкоцитов, то результат рассматривается как положительный. Чем больше показатель, тем хуже прогноз заболевания. Уровень LE-клеток в крови не зависит от возраста, пола и физиологических факторов (физической нагрузки, стресса, особенностей питания и т. д.).

Чаще волчаночные клетки находят при обострении заболевания. LE-клетки образуются при наличии антител, реагирующих с комплексом ДНК-гистон и комплемента. В исключительных случаях обнаруживают антитела к ДНК, тогда при этом возможно сочетание двух заболеваний.

Появление их в большом количестве — прогностически неблагоприятный признак. Патогномонично определение большого количества LE-клеток. В у-глобулиновой фракции находится волчаночный фактор, ответственный за образование LE-клеток, и другие антикуклеарные факторы. АНФ является IgG, направленным против ядер клеток больного, определяется иммунофлюоресцентным методом.

Волчаночный фактор вызывает разрушение лейкоцита и изменения в структуре его ядерного вещества. Лейкоцит с оттесненным к периферии ядром и фагоцитированным измененным ядерным веществом и называется волчаночной, или LE-клеткой. Различают прямые и косвенные методы определения LE-клеток. Частота обнаружения при СКВ LE-клеток колеблется, по данным различных авторов, от 70 до 90%. Диагностическое значение имеет наличие 1-2 волчаночных клеток на 1600-2000 лейкоцитов.

Поделись в социальных сетях

Во время ремиссии, а также при обострении процесса, но уже начатом лечении, в частности гормональном, LE-клетки можно не обнаружить. При отсутствии клеток рекомендуется провести несколько повторных исследований. В то время как наличие LЕ-клеток при подозрении на СКВ подтверждает этот диагноз, их отсутствие не позволяет его отклонить.

Сегментация ядра. Размер клеток большей частью увеличен. Вакуолизация встречается чаще в цитоплазме, иногда и в ядре. Наличие ее ядре указывает на более глубокие изменения в клетке и на тяжесть патологического процесса.

При резко выраженном LE-феномене в каждом поле зрения можно видеть несколько волчаночных клеток

В базофилах, эозинофилах, моноцитах и лимфоцитах описанные выше изменения при пельгеровской аномалии встречаются реже и менее выражены. Клетки Штодмейстера - вполне зрелые формы нейтрофильного ряда. Феномен асегментации ядер отмечается также в эозинофилах и базофилах и отсутствует в моноцитах. Получение высокой концентрации лейкоцитов в мазках, весьма облегчающей поиск-LЕ-клеток.

1. Предметные и покровные стекла. В 1948 г. Hargraves и соавт. в мазках костного мозга и периферической крови больных СКВ обнаружили при инкубации, 37°С, лейкоциты с особыми включениями, которые были названы LE-клетками.

LE-клетки не специфичны для СКВ, но чем чаще воспроизводится положительный тест при повторных исследованиях, тем выше вероятность данного диагноза. Повреждение клетки с деформацией (набуханием) ядра и утратой хроматина, базофилия, что служит предпосылкой для проявления активности антител. Материал ядра в виде серовато-дымчатой массы фагоцитируется клетками, которые становятся типичными для красной волчанки.

В одних случаях это измененные нефагоцитированные ядра, а в других — структуры ядра, которые уже были фагоцитированы и появились из разрушившихся фагоцитов. Это же происходит и в тканях. Вероятно, центральные структуры представляют собой промежуточную стадию между «loose bodies» и LE-клетками. В целом отмечают четкую корреляцию с пробой на LE-клетки. При использовании денатурированной ДНК и адъюванта удается индуцировать выработку антител.

Происхождение ДНК в этих реакциях не играет существенной роли. При разделении комплексов антиген — антитело всегда происходит определенная денатурация. Антитела к нативной ДНК имеют диагностическое значение практически только при СКВ (в остром периоде в 80-98%, в ремиссии — 30-70 %); лишь иногда их обнаруживают при определенных формах увеита.

При иммунофлюоресценции антитела к ДНК обнаруживают преимущественно по периферии ядра, однако иногда в виде нежного сетчатого образования они распределены и в других участках. Так, при СКВ эти антитела направлены в основном против HI, Н2В и Н3. Их выявляют у 30-60 %, а в низком титре даже у 80% больных. Для оценки иммунной системы больных СКВ целесообразно определять уровень антител к ДНК и активность комплемента. При РА часто выделяют СКВ-подобные формы течения, при которых выявляют LE-клетки.

Выделите ее и нажмите Ctrl+Enter. Портал о человеке и его здоровой жизни iLive. ВНИМАНИЕ! При использовании материалов портала ссылка на сайт обязательна. Могут определяться также свободно лежащие разрушенные ядра лейкоцитов (гематоксилиновые, волчаночные тельца), иногда окруженные лейкоцитами — феномен розетки!

Биохимический анализ крови: гиперпротеинемия и диспротеинемия, главным образом за счет гипергаммаглобулинемии. У 30-40% больных определяются антитела к антигену Смита (разновидность антинуклеарных антител). В качестве антигенного материала берут срезы крысиной печени, богатой ядрами, на которые наслаивают сыворотку больного и меченые флюоресцином антиглобулины. Для СКВ наиболее характерно периферическое, краевое свечение, обусловленное наличием антител к ДНК, и высокий титр этой реакции, более 1:1000.

Считается, что в сыворотке крови больного находится антинуклеарный фактор (фактор красной волчанки, волчаночный фактор),- АТ класса к гистоновому комплексу. При прямых методах плазма крови больного взаимодействует со взвесью его же лейкоцитов, при косвенных - плазма крови больного взаимодействует со взвесью лейкоцитов здорового человека.

Больше всего сегментов обнаруживается у нейтрофилов и мегакариоцитов (до 20 и более). Сегментация может сочетаться с пикнозом, хроматинолизом и вакуолизацией ядра и цитоплазмы. Хроматинолиз. При распаде хроматина он теряет свою нормальную структуру - растворяется.

Кариолиз - растворение лишь части ядра с сохранением его нормальной структуры. В местах растворения ядро теряет способность окрашиваться основными красками, контуры его нечеткие, размытые. Фрагментоз - процесс, при котором от ядра отделяются отдельные фрагменты (частицы). Они могут быть связаны с ядром тонкими нитями базихроматина.

Стекло с каплей помещают во влажную камеру и оставляют на 1 ч в термостате при 37°. Затем препарат высушивают на воздухе. При перечисленных состояниях LЕ-клетки встречаются в небольшом количестве, и их появление считают неспецифическим. При улучшении состояния больного в процессе его лечения количество LE-клеток уменьшается, а иногда они совсем исчезают.

Клетки красной волчанки, или LE-клетки (lupus erythematodes cells, LE-cells), были открыты в 1948 г. Hargraves, Richmond и Morton. Они представляют собой морфологическое проявление иммунологического феномена, характерного для системной красной волчанки (СКВ). Главное в указанном феномене - гибель нейтрофилов и, возможно, других клеток крови. В результате сложных аутоиммунных процессов происходит разрушение клеток, и из их ядерной субстанции (деполимеризованной ДНК) возникают бесструктурные шаровидные образования (гематоксилиновые тельца), которые затем фагоцитируются нейтрофильными лейкоцитами, а также другими клетками крови, способными к фагоцитозу (например, моноцитами). Фагоцитируемая субстанция представляет собой иммунный комплекс, состоящий из антинуклеарного фактора, остатков ядер лейкоцитов и комплемента.

Й. Тодоров (1963) выделяет три фазы клеток красной волчанки: 1) расщепление ядерного вещества лейкоцитов, появление в цитоплазме нейтрофильных лейкоцитов крупных гомогенных масс, окрашивающихся в розовато-фиолетовый цвет; 2) феномен «розетки» - расположение нейтрофилов вокруг более крупных образований, находящихся внеклеточно и еще не поглощенных лейкоцитами; 3) раздробленная ядерная масса, фагоцитированная нейтрофилами, включена в цитоплазму этих клеток, занимает центральную часть клетки и выталкивает ядро на периферию, где оно принимает форму полумесяца или серпа.

Иногда обнаруживаются нейтрофилы, в которых фагоцитированная субстанция не имеет гомогенного характера, а сохраняет структуру хроматана. Это клетки Тарта, их рассматривают как предстадию LE-клеток. Специфичными для системной красной волчанки считают типичные LE-клетки.

Для исследования LE-феномена предложены многочисленные методы, в основе которых лежит инкубация клеток больного в собственной плазме с дополнительным травматическим (механическим, ультразвуковым) воздействием на кровь; в результате из поврежденных ядер клеток освобождаются нуклеопротеины, формируются гематоксилиновые тельца, которые фагоцитируются неповрежденными нейтрофилами в присутствии антинуклеарного фактора.

Методика Харгревеса-Циммера

Принцип . Механическое повреждение лейкоцитов для усиления LE-феномена.

Реактивы : 1) метиловый спирт; 2) краска Романовского-Гимзы или азур-эозин.

Ход исследования . В пробирку набирают 10 мл венозной крови и оставляют при комнатной температуре (можно в термостате при 37 °С) на 2 ч. Свернувшуюся кровь выливают на металлическое сито, поставленное на чашку Петри, и фарфоровым пестиком протирают сгусток. Содержимое чашки Петри переносят в центрифужную пробирку и центрифугируют при 2000 об./мин в течение 5 мин. Надосадочную жидкость удаляют, а из верхнего слоя осадка готовят мазки. Высохшие мазки фиксируют метанолом и окрашивают по принятым в гематологии методикам.

Методика Цинкхама-Конли в модификации Е. Н. Новоселовой

Принцип . Механическое воздействие на кровь, облегчающее образование LE-феномена.

Реактивы . 1) натрия оксалат; 2) краска Романовского-Гимзы или азур-эозин; 3) метиловый спирт для фиксации мазков.

Ход исследования . В пробирку с 10 мг оксалата натрия вносят 10 мл венозной крови, тщательно перемешивают и оставляют стоять на 1,0–1,5 ч при комнатной температуре. Вносят в пробирку 8–10 стеклянных бусинок диаметром 3–4 мм, плотно закрывают пробкой и перемешивают, переворачивая пробирку пробкой то вверх, то вниз в течение 30 мин. Затем отстаивают в течение 1 ч при комнатной температуре для разделения слоев. Плазму отсасывают пастеровской пипеткой и вносят в центрифужную пробирку. Центрифугируют при 1000 об./мин в течение 5 мин. Надосадочную жидкость удаляют, а из осадка готовят мазки. Высохшие мазки фиксируют в метиловом спирте и окрашивают гематологическим красителем.

Нормальные величины . У здоровых людей LE-клетки в крови отсутствуют.

Клиническое значение . LE-клетки обнаруживаются у 70–80 % больных системной красной волчанкой, в период активного проявления болезни. Их количество может достигать 10–20 клеток и более на 1000 нейтрофилов (Насонова В. А., Астапенко М. Г., 1989). Исследование целесообразно проводить до начала специфической терапии. Отрицательный результат исследования не отвергает диагноз: это возможно в ранний период заболевания, при большой потере белка с мочой. Небольшое количество LE-клеток обнаруживается при хроническом активном гепатите, смешанном заболевании соединительной ткани, лекарственной СКВ, узелковом периартериите, дерматомиозите, а единичные - при системном ревматоидном артрите.

Большинство лабораторных исследований человеку известно уже с детства, с плановых прививок и медицинских осмотров. Все знают, для чего проводится анализ на сахар, печеночные или почечные пробы. Формулировка «LE-клетки» многих заставляет задуматься, что же это за показатель? За этим обозначением скрывается особый тип лейкоцитов, клеток, которые были частично разрушены и не могут выполнять свои функции. Для обнаружения LE-клетки анализ проводится с использованием крови из вены.

Аутоиммунный процесс

Клетки типа LE или LE-фактор используется в медицине, как специфический маркер для заболеваний аутоиммунной природы. Изначально поврежденные клетки были здоровыми лейкоцитами, чаще всего нейтрофилами. После взаимодействия с особым видом иммуноглобулина, который начал вырабатывать организм, лейкоциты частично разрушаются. В крови LE-клетки образуются при аутоиммунных процессах внутри организма. Таким образом, организм человека на клеточном уровне атакует сам себя. В результате снижается и общий иммунитет.

С помощью LE-клеток анализ крови показывает наличие у пациента тяжелого аутоиммунного заболевания, которое называется системная красная волчанка. Также анализ на LE-фактор может выявить другие типы заболеваний, но только в качестве дополнительного медицинского теста. Появление LE-фактора является отличительной чертой красной волчанки, анализ на этот показатель используется в качестве диагностической процедуры.

В начале развития заболевания антитела атакуют здоровые лейкоциты и разрушают клеточное ядро. В результате клетки теряют свои функции и превращаются в так называемые «волчаночные тельца». Эти поврежденные клетки благодаря своим функциям, поглощают нейтрофилы, как продукт отходов. Так появляются лейкоциты, содержащие в себе разрушенные ядра других лейкоцитов (LE-клетки).

Показания для анализа

Анализы крови на LE-клетки, как правило, не назначаются без специфических показаний. При большинстве аутоиммунных заболеваний этот тип лейкоцитарных клеток может присутствовать в организме. Однако в этом случае показатели будут варьироваться и норм не существует. Поэтому иммуноферментный анализ на измененные лейкоциты используется для диагностики волчанки. Это заболевание системное, то есть поражает постепенно различные системы и органы человека.

Проявляется волчанка не сразу, существуют периоды обострения заболевания и периоды, в которые симптомы развиты очень слабо. Заподозрить красную волчанку может любой врач, к которому человек обратился за помощью, в зависимости от симптомов. Чаще всего это ревматолог, так как нередко волчанка провоцирует развитие воспалительного процесса с суставах. Характерными признаками развития этого аутоиммунного заболевания являются:

Кожные высыпания и заболевания типичная проблема при волчанке. Характерная для болезни «бабочка» на лице, которая часто упоминается в медицинских сериалах, проявляется только у половины пациентов. Поражение кожи может произойти в любом месте. Сыпь представляет собой чешуйчатые красные высыпания.
Ноющие боли в районе суставов и мышц наиболее распространенные симптомы заболевания. LE-фактор приводит к воспалению и разрушению суставной ткани, провоцируя развитие артрита и других болезней суставов. Согласно данным медицинских наблюдений при развитии красной волчанки 70% пациентов в первую очередь жалуются на боли в суставах.
Общая слабость еще один признак аутоиммунного заболевания. Как правило, слабость редко настораживает человека, так как причиной состояния может быть и обычная усталость или недосыпание. Однако если слабость носит постоянный характер и мешает вести активный образ жизни, есть смысл сдать анализ на LE-клетки.
Солнечный свет или солярий, как правило, усугубляют поражение кожи.
При красной волчанке нарушается работа нервной системы, а также психическое состояние человека. Пациенты чувствуют депрессию и раздражительность.
Незначительное повышение температуры тела, которое длится дольше недели явный признак заболевания.
Возможна потеря волос, ломкость ногтей.
Довольно часто люди, страдающие волчанкой, стремительно теряют вес.

Проведение теста

Для исследования используется кровь из вены. Как и другие показатели, LE-фактор исследуется только натощак. Анализ проводится как для подтверждения первичного диагноза, так и для отслеживания эффективности лечения. Для проведения теста в лабораторных условиях требуется 10 мл венозной крови.

Существует специальная методика для определения показателя, усовершенствованная Е. Н. Новоселовой. В биологический образец добавляется специальное вещество, этилендиаминуксусная кислота, которое повышает достоверность анализа. От образца отделяются лейкоциты. Лейкоцитарную массу фильтруют либо встряхивают и помещают в инкубационную среду. Если после проведенных манипуляций начинают образовываться LE-клетки, результат считается положительным.

Результат исследования

У пациентов, страдающих системной красной волчанкой, результат анализа на LE-фактор будет положительным. Тяжесть заболевания и прогноз на выздоровление напрямую зависит от концентрации измененных лейкоцитов.

Чем выше количество LE-клеток, тем хуже состояние пациента и тяжелее лечение.

Полное отсутствие данного показателя в исследуемом образце крови соответствует норме. Однако, как свидетельствует практика, отрицательный результат анализа не гарантирует отсутствие заболевания. На ранних стадиях волчанки измененные лейкоциты обнаруживаются только у 70-80% больных. Анализы на LE-клетки могут указывать не только на красную волчанку, но и на другие заболевания.

Лейкоз в острой форме
Склеродермия
Гепатит в стадии обострения или в острой форме
Анемия
Ревматоидный артрит
Эритродермия, вызванная каким-либо заболеванием
Милиарный туберкулез

Системная красная волчанка серьезное заболевание, которое необходимо лечить и держать под контролем и надзором врача. Прогноз для пациента и способность полноценно жить, не взирая на заболевание, зависит от качества лечения и от того, когда была диагностирована волчанка. Анализ на LE-клетки позволяет выяснить наличие и концентрацию пораженных клеток. На основании полученных данных врач подбирает наиболее эффективную терапию для каждого пациента. Лечение может снизить количество LE-клеток до нуля.