Метод полимеразной цепной реакции, или ПЦР, используется в лабораторной диагностике большинства инфекционных заболеваний. Он позволяет обнаружить в исследуемом материале генетический материал микроорганизмов и таким образом идентифицировать их.

Что это такое

Метод был разработан в 1983 году, а в 1993 году его автор – Мюллис – получил Нобелевскую премию.

Основы метода

ПЦР-анализ обнаруживает в исследуемом материале уникальный генетическй материал, позволяющий идентифицировать микроорганизм.

Каждый вид микроорганизмов, растений или животных имеет уникальный набор хромосом. Они образованы ДНК – дезоксирибонуклеиновой кислотой. Мелкие фрагменты ДНК называются нуклеотидами, а их определенная последовательность составляет ген. Каждый ген кодирует синтез одного белка, например, коллагена, альбумина и всех остальных. Последовательность нуклеотидов уникальна. Для каждого вида живых организмов существуют общие участки ДНК, отвечающие за однообразие в пределах этого вида.

Анализ ДНК нескольких сотен микробов, попавших в материал для исследования, не позволит выявить видовые закономерности. Необходимо во много раз увеличить количество значимых генетических компонентов, что даст возможность их идентифицировать. Эту задачу и решает метод ПЦР.

Исследование относится к области молекулярной биологии. К ДНК микроба добавляются ДНК-полимераза и свободные нуклеотиды. Полимераза – фермент, обеспечивающий многочисленное копирование нужного участка из имеющихся нуклеотидов. Запускают процесс праймеры – короткие нити рибонуклеиновой кислоты (РНК), прикрепляющиеся к началу нужного гена.

Процесс анализа состоит из нескольких фаз, каждая из которых требует определенного времени и температурного режима. В течение нескольких часов из тысячной доли грамма ДНК бактерий получается нужное количество материала для анализа. Современная аппаратура дает возможность многократно копировать ДНК даже одной клетки, например, сперматозоида.

Ход исследования

Этапы анализа:

• взятие биологического материала (крови, мочи, влагалищных выделений, слюны и так далее) у пациента и доставка в лабораторию;
• разделение двух нитей ДНК, переплетение которых образует хромосому, и очищение их от посторонних примесей;
• удвоение нужного участка нити ДНК, в результате ее количество растет в геометрической прогрессии;
• обработка полученного материала растворами, вызывающими специфическое свечение полученных фрагментов ДНК, по этому окрашиванию распознают, какая бактерия или вирус были в источнике; для разделения фракций ДНК используют электрофорез.

Длительность анализа составляет 4-5 часов.

Преимущества метода ПЦР

Полимеразная цепная реакция обладает такими преимуществами перед традиционными способами определения возбудителей инфекции:

• прямое определение генов микроорганизма, в отличие от выявления антител к нему при многих других способах идентификации;
• специфичность, то есть определение конкретного вида возбудителя;
• чувствительность: для диагностики бывает достаточно даже одной клетки микроорганизма; в целом требуемое количество возбудителя в 10 раз меньше, чем для других методов;
• универсальность биоматериала – исследуется не только кровь, но и клетки плотных тканей, соскобы с эпителия, слизистые выделения и любые другие среды, где может быть микроб;
• скорость получения результата в несколько раз выше, чем при использовании других методов;
• возможность распознавания хронических, вялотекущих и скрытых инфекций;
• дезинфекция взятого у больного материала и исключение заражения сотрудников лаборатории;
• полная автоматизация процесса исследования.

Недостатки анализа

Минусы ПЦР связаны в основном с ее технической сложностью:

• необходимо правильно выбрать последовательности РНК – праймеры, а также приготовить смесь нуклеотидов для синтеза ДНК;
• метод очень чувствителен, поэтому если в образце есть разные виды микробов, он может давать неверные результаты;
• нужно тщательно очищать анализируемый материал от примесей белков человека и лекарств, так как они снижают точность диагностики;
• требуется контрольное сравнение результатов с образцами, заведомо содержащими или не содержащими материал микроорганизмов, а также вообще не включающими ДНК для определения ошибок и загрязнений.

Ложноотрицательные результаты ПЦР вызваны нарушением техники анализа и изменениями в генетической последовательности любого из компонентов реакции. Встречаются и ложноположительные данные – при случайном совпадении нуклеотидов праймеров и других применяемых реактивов с одним из генов микроорганизма.

Выделение микроорганизма не всегда говорит о том, что именно он стал причиной болезни. При анализе ДНК человека существует еще одна проблема: генетическая основа большинства заболеваний до сих пор неизвестна, что пока делает невозможной диагностику неинфекционной патологии на микробиологическом уровне. Это направление медицинской генетики очень активно развивается.

Показания для ПЦР-исследования

В большинстве случаев ПЦР-диагностику применяют у лиц с инфекционными заболеваниями с целью определения микроорганизма, вызвавшего болезнь.

Этот анализ используется в таких ситуациях:

• необходимость выявления и идентификации вирусов, бактерий, простейших при любых инфекционных заболеваниях, когда требуется точность диагностики;
• идентификация личности путем сравнения с генетическим материалом известного происхождения;
• анализ тканей, полученных путем тонкоигольной , которые очень трудно исследовать другими методами;
• диагностика лейкозов и злокачественных опухолей;
• проведение экспериментов с приживляемостью эмбриональных стволовых клеток у животных (у людей применение таких клеток запрещено), а также выведение линий лабораторных мышей с заранее заданным генетическим заболеванием.

Перспективы применения ПЦР-реакции и ее разновидностей в медицине и биологии захватывают воображение – от испытания новых лекарств на генном уровне до создания трансгенных организмов с заданными свойствами. Работы в этом направлении ведутся в крупнейших лабораториях мира, что помогает совершенствовать метод ПЦР и на прикладном уровне, для диагностики инфекционных болезней человека.

В медицине ПЦР-метод обычно используется для диагностики и оценки эффективности лечения таких заболеваний:

• внутриклеточные инфекции, например,
• не сдавать ПЦР во время и в течение 4 дней после (у женщин).

Общие правила подготовки:

• за 2 дня исключить интенсивные физические нагрузки, занятия спортом;
• с утра в день исследования не курить и не употреблять пищу;
• если материал будет браться из полости рта и носоглотки – утром не чистить зубы.

От выполнения этих простых правил зависит достоверность этого точного, но недешевого метода диагностики. Самостоятельная интерпретация результата не даст нужной информации о болезни и ее лечении. Вот поэтому после получения данных ПЦР-исследования необходимо обратиться к врачу.

К какому врачу обратиться

При подозрении на венерическое заболевание на ПЦР направляет гинеколог, уролог, андролог, венеролог. Исследование при гепатитах и ВИЧ-инфекции назначает инфекционист, при туберкулезе – фтизиатр. ПЦР в своей практике используют врачи многих специальностей, например, онкологи, гематологи, гастроэнтерологи, генетики.

Полезная информация о ПЦР-анализе.

Для адекватного и эффективного лечения многих инфекционных заболеваний необходимо своевременное установление точного диагноза. В решении этой задачи в наши дни привлекаются высокотехнологичные методы диагностики основанные на методах молекулярной биологии. В настоящий момент полимеразная цепная реакция (ПЦР) уже достаточно широко применяется в практической медицине как наиболее надежный инструмент лабораторной диагностики .

Чем объясняется популярность ПЦР в настоящее время?

Во-первых, данный метод используется для выявления возбудителей различных инфекционных заболеваний с высокой точностью.

Во-вторых, для контроля эффективности проведенного лечения.

В различных руководствах, проспектах, статьях, а также объяснениях врачей-специалистов, мы часто сталкиваемся с употреблением непонятных терминов и слов. Действительно трудно рассказать о высокотехнологичных продуктах науки обыденными словами.

В чем суть и механика ПЦР диагностики?

Каждый живой организм имеет свои уникальные гены. Гены располагаются в молекуле ДНК, которая собственно и является «визитной карточкой» каждого конкретного организма. ДНК (генетический материал) – это очень длинная молекула, которая состоит из «кирпичиков», называемых нуклеотидами. У каждого возбудителя инфекционных заболеваний они расположены строго специфично, то есть в определенной последовательности и комбинации. Когда необходимо понять имеется ли у человека тот или иной возбудитель, забирается биологический материал (кровь, моча, слюна, мазок), который содержит ДНК или фрагменты ДНК микроба. Но количество генетического материала возбудителя очень мало, и невозможно сказать какому именно микроорганизму он принадлежат. Для решения этой задачи и служит ПЦР. Суть полимеразной цепной реакции заключается в том, что берется малое количество материала для исследования, содержащего ДНК, а в процессе ПЦР происходит увеличение количества генетического материала, принадлежащего конкретному возбудителю и, таким образом, его можно идентифицировать.

ПЦР диагностика – генетическое исследование биоматериала.

Идея метода ПЦР принадлежит американскому ученому K.Mullins, которую он предложил в 1983 году. Однако широкое клиническое применение получила лишь в средине 90-х годов XXвека.

Разберемся с терминологией, что же это такое – ДНК и т.д. Каждая клетка любого живого существа (животного, растения, человека, бактерии, вируса) имеет хромосомы. Хромосомы – это хранители генетической информации, которые содержат всю последовательность генов каждого конкретного живого существа.

Каждая хромосома состоит из двух нитей ДНК, закрученных в спираль друг относительно друга. ДНК – химически это дезоксирибонуклеиновая кислота, которая состоит из структурных компонентов – нуклеотидов. Нуклеотидов бывает 5 видов – тимин (Т), аденозин (А), гуанин (Г), цитозин (Ц) и урацил (У). Нуклеотиды располагаются друг за другом в строгой индивидуальной последовательности, образуя гены. Один ген может состоять из 20-200 таких нуклеотидов. Например, ген, кодирующий выработку инсулина, состоит из 60 пар нуклеотидов.

Нуклеотиды имеют свойство комплементарности. Это означает что напротив аденина (А) в одной цепочке ДНК обязательно стоит тимин (Т) в другой цепочке, а напротив гуанина (Г) – цитозин (Ц). Схематически выглядит следующим образом:
Г - Ц
Т - А
А - Т
Данное свойство комплементарности ключевое для проведения ПЦР.

Помимо ДНК такую же структуру имеет РНК – рибонуклеиновая кислота, отличающаяся от ДНК тем, что вместо тимина в ней используется урацил. РНК – является хранителем генетической информации у некоторых вирусов, которые называются ретровирусами (например, ВИЧ).

Молекулы ДНК и РНК могут «размножаться» (данное свойство используется для проведения ПЦР). Происходит это следующим образом: две нити ДНК или РНК, отходят друг от друга в стороны, на каждую нить садится специальный фермент, который синтезирует новую цепочку. Синтез идет по принципу комплементарности, то есть, если в исходной цепочке ДНК стоит нуклеотид А, то во вновь синтезированной будет стоять Т, если Г – то Ц и т.д. Этот специальный фермент -«строитель» для начала синтеза нуждается в «затравке» - последовательности из 5-15 нуклеотидов. Данная «затравка» определена для каждого гена (гена хламидии , микоплазмы , вирусов) экспериментально.

Итак, каждый цикл ПЦР состоит из трех стадий. В первую стадию происходит так называемое раскручивание ДНК – то есть разделение связанных между собой двух цепей ДНК. Во вторую - происходит присоединение «затравки» к участку нити ДНК. И, наконец, удлинение данных нитей ДНК, которое производится ферментом-«строителем». В настоящее время весь этот сложный процесс протекает в одной пробирке и состоит из повторяющихся циклов размножения определяемой ДНК с целью получения большого количества копий, которые могут быть, затем выявлены обычными методами. То есть из одной нити ДНК мы получаем сотни или тысячи.

Этапы проведения ПЦР исследования

Забор биологического материала для исследования

В качестве пробы служит различный биологический материал: кровь и ее компоненты, моча, слюна, отделяемое слизистых оболочек, спинномозговая жидкость, отделяемое раневых поверхностей, содержимое полостей тела. Все биопробы собираются одноразовыми инструментами, а набранный материал заключают в пластиковые стерильные пробирки или помещают на культуральные среды, с последующей транспортировкой в лабораторию.

В забранные пробы добавляют необходимые реагенты и ставят в программируемый термостат – термоциклер (амплификатор). В амплификаторе 30-50 раз повторяется цикл ПЦР, состоящий из трех этапов (денатурация, отжиг и удлинение). Что это означает? Рассмотрим подробнее.

Этапы непостредственно ПЦР реакции, копирование генетического материала

I этап ПЦР - Подготовка генетического материала для копирования.
Происходит при температуре 95° С, при этом нити ДНК разъединяются, и на них могут садиться «затравки».

«Затравки» изготавливают промышленным способом различные научно-производственные объединения, а лаборатории покупают уже готовые. При этом «затравка» для выявления, например, хламидии, работает только для хламидии и т.д. Таким образом, если тестируется биоматериал на наличие хламидийной инфекции, то в реакционную смесь помещается «затравка» для хламидий; если тестирование биоматериала на вирус Эпштейн-Барра, то и «затравка» для вируса Эпштейн-Барра.

II этап – Объединение генетического материала возбудителя инфекции и «затравки».
Если имеется ДНК определяемого вируса или бактерии , «затравка» садится на эту ДНК. Этот процесс присоединения «затравки» и есть второй этап ПЦР. Данная стадия проходит при температуре 75°С.

III этап - Копирование генетического материала возбудителя инфекции.
Это процесс собственно удлинения или размножения генетического материала, который происходит при 72°С. К «затравкам» подходит фермент- «строитель» и синтезирует новую цепочку ДНК. С окончанием синтеза новой цепочки ДНК, заканчивается и цикл ПЦР. То есть за один цикл ПЦР происходит увеличение количества генетического материала в два раза. Например, в исходной пробе имелось 100 молекул ДНК какого-либо вируса, после первого цикла ПЦР в пробе будет уже 200 молекул ДНК тестируемого вируса. Один цикл длится 2-3 минуты.

Для образования достаточного количества генетического материала для идентификации, обычно производится 30-50 циклов ПЦР, что занимает 2-3 часа.

Этап идентификации размноженного генетического материала

Собственно ПЦР на этом заканчивается и далее идет не менее значимый этап идентификации. Для идентификации используют метод электрофореза или меченые «затравки». При использовании электрофореза полученные нити ДНК разделяются по размерам, и наличие фрагментов ДНК разной длины свидетельствует о положительном результате анализа (то есть о наличии того или иного вируса, бактерии и т.д.). При использовании меченых «затравок», к конечному продукту реакции добавляют хромоген (краситель), вследствие чего ферментативная реакция сопровождается образованием окраски. Развитие окраски прямо свидетельствует, что вирус или другой выявляемый агент присутствуют в исходной пробе.

На сегодняшний день, используя меченые «затравки», а также соответствующее программное обеспечение, можно производить сразу и «чтение» результатов ПЦР. Это так называемаяreal-time ПЦР.

Почему ПЦР диагностика обладает такой ценностью?

Одним из существенных преимуществ метода ПЦР является высокая чувствительность – от 95 до 100%. Однако, эти преимущества должны базироваться на непременном соблюдении следующих условий:

1. корректный забор, транспортировка биологического материала;
2. наличие стерильного, одноразового инструментария, специальных лабораторий и обученного персонала;
3. строгое соблюдение методики и стерильности во время проведения анализа

Чувствительность различается для различных выявляемых микробов. Так, например, чувствительность метода ПЦР для выявления вируса гепатита С составляет 97-98%, чувствительность для выявления уреаплазмы – 99-100%.

Возможности, заложенные в ПЦР-анализе, позволяют достичь непревзойденной аналитической специфичности. Это означает выявление именно того микроорганизма, который искали, а не похожего или близкородственного.
Диагностическая чувствительность и специфичность метода ПЦР, зачастую превосходят таковые и для культурального метода, называемого «золотым стандартом» для выявления инфекционных заболеваний. Учитывая продолжительность выращивания культуры (от нескольких дней до нескольких недель), преимущество метода ПЦР становится очевидным.

ПЦР в диагностике инфекций
Преимущества метода ПЦР (чувствительность и специфичность) определяют широкий спектр применения в современной медицине.
Основные области применения ПЦР-диагностики:

1. диагностика острых и хронических инфекционных заболеваний различной локализации
2. контроль эффективности проведенной терапии
3. уточнение вида возбудителя

ПЦР используется в акушерстве, гинекологии, неонатологии, педиатрии, урологии, венерологии, нефрологии, клинике инфекционных болезней, офтальмологии, неврологии, фтизиопульмонологии и др.

Использование ПЦР-диагностики производится в совокупности с другими методами исследования (ИФА, ПИФ, РИФ и др.). Их сочетание и целесообразность определяет лечащий врач.

Возбудители инфекций, обнаруживаемые методом ПЦР

Вирусы:

1. ретровирусы HIV-1 и HIV-2
2. герпетиформные вирусы
3. вирус простого герпеса 1 и 2 типов

Полимеразная цепная реакция (ПЦР-диагностика инфекций) основана на определении участков ДНК, специфичных для определенных патогенных микроорганизмов, в образцах биоматериала (соскобах эпителиальных клеток урогенитального тракта, крови или др.). Полимеразная цепная реакция является «золотым стандартом» диагностики большинства бактериальных, вирусных, грибковых инфекций. Тест обладает высокой специфичностью и чувствительностью, поскольку позволяет определять фрагменты ДНК, характерные для конкретного возбудителя, за счет их многократного копирования (амплификации) в лабораторных условиях. Обнаружение патогенов методом ПЦР возможно еще до возникновения симптомов инфекционного заболевания, т. е. на доклинической стадии, а также при латентном течении инфекции и в тех случаях, когда другие лабораторные методики (бактериологические, вирусологические, серологические) еще не дают положительного результата.

Полимеразная цепная реакция (ПЦР), как метод лабораторной диагностики, был запатентован американским биохимиком Кэри Мюллисом в 1983 году, хотя параллельные исследования в этой области велись некоторыми другими американскими и советскими учеными. Однако именно К. Мюллис считается родоначальником метода ПЦР, за что спустя десятилетие был удостоен Нобелевской премии в области химии. Внедрение ПЦР в клиническую практику совершило настоящую революцию в диагностике инфекционных заболеваний, поскольку сделало возможным быстро (в течение 1-2 дней) выявлять даже самые малые концентрации патогенов, присутствующих в организме. Это позволяет диагностировать не только активные стадии заболеваний, но также их хроническое и скрытое течение. ПЦР исследования находят применение в диагностике вирусных гепатитов, ВИЧ, ЗППП, туберкулеза, респираторных, кишечных, трансмиссивных инфекций и мн. др. В настоящий момент анализы методом ПЦР проводятся повсеместно, во всех крупных лабораториях Москвы.

Сущность исследования

Полимеразная цепная реакция позволяет идентифицировать патогенные микроорганизмы путем выявления их генетического материала (РНК или ДНК) в биологических пробах, взятых от обследуемого человека. Это достигается путем многократного удвоения специфического фрагмента нуклеиновой кислоты патогена в присутствии фермента ДНК-полимеразы в лабораторных условиях. При этом копируется (амплифицируется) только строго определенный участок ДНК, специфичный для конкретного возбудителя, при его наличии в исследуемом материале. Весь лабораторный процесс проходит 3 этапа.

1. Выделение ДНК. Для очистки ДНК от посторонних примесей (белков, крови, слизи) пробу пропускают через сорбент, отмывают, центрифугируют, высушивают. Полученный осадок растворяют, получая очищенную ДНК в элюенте.

2. Амплификация . ПЦР-анализ проводят в амплификаторе – специальном приборе-термостате, который обеспечивает периодическое нагревание и охлаждение пробирок в циклическом режиме с точностью до 0,1°C. Обычно в ходе одного исследования выполняется 20-35 циклов, каждый из которых включает три фазы: денатурации ДНК, отжига и элонгации матричной цепи. На первом этапе пробирку с реакционным раствором, содержащим ДНК-матрицу, два праймера (короткие синтетические олигонуклеотиды, комплементарные концам искомого фрагмента), ДНК-полимеразу, дезоксинуклеотидтрифосфаты, ионы магния и буферный раствор, нагревают до 93-95°С на 30-40 сек. В результате нагрева происходит денатурация – расхождение цепей двухцепочечной ДНК-матрицы вследствие разрушения водородных связей между ними. Затем температуру смеси снижают до 50-65°С, что позволяет праймерам связаться с ДНК-матрицей. Эта фаза ПЦР (фаза отжига) длится не более 2-х минут. Для протекания третьей стадии – элонгации или достраивания матричной цепи – смесь вновь подогревают до 72°С (время третьей фазы зависит от длины амплифицируемого участка – в среднем 20-40 сек.). Таким образом, за два-три десятка циклов в пробирке накапливается множество копий фрагмента ДНК, достаточное для обнаружения, идентификации, качественной или количественной оценки возбудителя.

3. Электрофорез. Полученный субстрат, содержащий продукты амплификации, помещают в лунки с агарозным гелем. Анализатор подключают к источнику тока, проводя электрофорез. Под действием электрического тока фрагменты нуклеиновых кислот разделяются и затем становятся хорошо видимы в трансиллюминаторе в лучах ультрафиолета в виде светящихся полосок оранжевого цвета. В заключении получают изображение (электрофореграмму), которую анализируют на ПК.

Сегодня, наряду с вышеописанной методикой, широкое применение находит ПЦР в реальном времени (Real-Time PCR). От стандартной ПЦР ее отличает добавление в реакционную смесь высокоспецифичных флуоресцентных меток, что позволяет измерять количество амплифицированной ДНК в настоящем времени сразу после завершения каждого цикла. Real-Time ПЦР предоставляет возможность проводить как качественный, так и количественный анализ, благодаря чему делаются выводы о стадии и динамике заболевания, эффективности этиотропной терапии. Также методика используется для генотипирования - определения штаммов вирусов (например, ВПЧ или гепатита В).

Сферы применения

Основные области применения ПЦР-диагностики включают:

• инфекциологию - выявление возбудителей широкого круга воздушно-капельных, трансмиссивных и гемотрансмиссивных инфекционных заболеваний;
• гинекологию , урологию и венерологию – выявление возбудителей урогенитальных инфекций;
• онкологию и гематологию - детекция опухолевых клеток и генов, ассоциированных с онкологическими заболеваниями;
• генетику - диагностика наследственных заболеваний, установление родства и отцовства;
• эпидемиологию – выявление патогенов в пище;
• экологию – мониторинг объектов окружающей среды (почвы, воды);
• судебную медицину – идентификация личности и др.

Специфичность ПЦР в диагностике этих и других инфекций составляет 100%, что значительно превышает таковую у микробиологических, серологических, микроскопических методик. Бесспорным достоинством ПЦР-диагностики является возможность одновременно идентифицировать сразу несколько возбудителей в одной биопробе, поэтому многие лаборатории предлагают комплексные исследования - ПЦР-6, ПЦР-9, ПЦР-12, ПЦР-20 инфекций .

Правила взятия материала

Биологическими образцами, которые могут быть исследованы с помощью ПЦР, могут являться практически любые секреты организма - кровь, слюна, моча, сперма, кал, мокрота, отделяемое половых путей, спинномозговая, плевральная, суставная жидкость, а также эпителиальные соскобы и биоптаты. Однако точность результатов во многом зависит не только от неукоснительного соблюдения методики анализа, но и от правильности сбора и транспортировки исследуемого материала.

Забор любых биологических образцов для ПЦР-диагностики производится в условиях процедурного кабинета. Для этих целей используется исключительно стерильный (желательно, одноразовый) инструментарий и контейнеры. Для взятия крови применяются специальные вакуумные системы и одноразовые пробирки с антикоагулянтом. Соблюдение асептики и антисептики позволяет исключить контаминацию материала извне и, следовательно, получение недостоверных данных.

Существуют определенные требования при подготовке к анализу. Так, перед сдачей мазков и соскобов из урогенитального тракта необходимо за 3 суток до анализа исключить половые контакты, не подмываться антибактериальными средствами, не мочиться за 3 часа. У женщин биоматериал рекомендуется брать накануне менструации или через 1-2 дня после ее окончания, поскольку в эти периоды численность возбудителей инфекции максимально высока. Забор крови для ПЦР-диагностики должен производиться в утренние часы натощак. Если материалом для исследования служит моча, то собирается ее первая утренняя порция. Перед сдачей слюны полость рта требуется трехкратно прополоскать физиологическим раствором.

Взятую пробу необходимо как можно скорее доставить в диагностическую лабораторию (при невозможности незамедлительной транспортировки материал хранится в холодильнике при температуре от +4°С до +8°С). В отношении некоторых видов биоматериала допускается однократное замораживание и оттаивание. Контейнеры (пробирки) с пробами должны быть промаркированы и снабжены направлением на ПЦР-исследование, заполненным по установленной форме. Окончательный результат ПЦР анализа бывает готов уже в течение 1-2 суток (иногда буквально через несколько часов).

Результаты

Качественный результат ПЦР-обследования может быть положительным либо отрицательным. Положительный анализ указывает на выявление искомых инфекционных агентов в исследуемом материале; отрицательный – на их отсутствие. Получение ложноотрицательных результатов практически исключено; их минимальный процент может быть связан с латентной инфекцией или хронической инфекцией вне обострения. Ложноположительные реакции обычно обусловлены человеческим фактором (неправильным сбором, хранением и транспортировкой образцов, нарушением методики проведения ПЦР).

Количественная оценка (определение числа комплектов ДНК или РНК возбудителя в образцах материала, МЕ/мл) позволяет судить о так называемой вирусной/бактериальной нагрузке на организм, т. е. активности течения инфекционного процесса. Количественный анализ помогает подобрать дозу лекарственных препаратов и определиться с длительностью курса лечения. Через 1 месяц после завершения этиотропной терапии проводится контрольное ПЦР-исследование.

Сдать анализы методом ПЦР в Москве можно в специализированных лабораториях и лабораторных отделениях медицинских центров, оборудованных необходимой аппаратурой и тест-системами. Цена на ПЦР зависит от количества определяемых возбудителей, качественного или количественного тестирования, вида анализируемого материала.

Сдать анализы в Москве по доступным ценам предлагает частная клиника «Благое дело». Благодаря сотрудничеству с ведущими лабораториями столицы, мы выполняем самый широкий спектр анализов по низким ценам, с гарантией качества.

Анонимная сдача анализов современных, высокоточных, выявляющих инфекцию в сложных случаях, когда используемые ранее методы диагностики не дали результата - это урологический центр, клиника «Благое дело».

СовременнаяПЦР диагностика - цена, которой зависит от того, на какую бактериальную инфекцию сдается анализ - это клиника «Благое дело».

Если инфекция будет обнаружена, то врач венеролог анонимно примет Вас и назначит грамотное лечение половой инфекции.

Анализ ПЦР (полимеразная цепная реакция)

В чем состоит суть данного метода? Специальный фермент ДНК-полимеразы способен в искусственных условиях значительно увеличить в объеме заданную микробную среду. Если во взятом образце количество патогенных микроорганизмов увеличится за счет биохимических действий, то бактерию можно будет увидеть в микроскоп.

Анализ ПЦР, цена которого зависит от вируса, на который он берется, представлена в нижележащих таблицах. Этот анализ позволяет диагностировать различные инфекционные заболевания.

Экспресс анализ на венерические заболевания

В случае, когда Вы точно не уверены в наличии венерических половых инфекций в организме, стоит сдать сначала экспресс анализ на венерические заболевания . Данный анализ позволяется выявить наличие венерического заболевания. Следующим этапом становится сдача анализа непосредственно на те половые инфекции, которые были обнаружены венерологом. В большинстве случаев это анализ ПЦР. Ниже приведены цены на ПЦР в нашей частной московской клинике "Благое дело".

Анализ ПЦР на 12 половых инфекций

ПЦР - диагностируемые заболевания

Анализ ПЦР на ВПЧ: цена

Вирус папилломы человека - распространенный во всех странах вирус, вызывающий множество заболеваний у мужчин и женщин. Сейчас медицине известны более ста типов этого вируса. Анализ на ВПЧ дает возможность не только получить ответ - имеется вирус или нет. Если он обнаружен, то сразу же уточняется его тип.

Анализ ПЦР на ВПЧ, цена которого указана в таблице ниже, позволяет специалистам клиники «Благое дело» подобрать наиболее подходящий эффективный метод лечения.

Анализ на ВПЧ	Цена в рублях
Анализ ВПЧ 16 типа и ВПЧ 18	качественный - 290 руб./ количественный - 600 руб.
Анализ ВПЧ 6 типа и ВПЧ 11
Анализы на ВПЧ высокого онкогенного риска (16,18,31,33,35,39,45,51,52,56,58,59,68)	качественный - 500 руб./ количественный - 1000 руб.
Анализ ВПЧ-тест расширенный (с определением количества и типа вируса)
ВПЧ-ПАП-тест (комплекс тестов ВПЧ расширенный с определением количества и типа вируса и ПАП-тест)
ВПЧ-ПАП-тест жидкостный (комплекс анализов ВПЧ расширенный с определением количества и типа вируса и ПАП-тест)
ВПЧ-тест расширенный жидкостный (анализ с определением количества и типа вируса ВПЧ)
ПАП-тест жидкостный

ПЦР на сифилис: цена

ПЦР на сифилис дает возможность определить заболевание в тот момент, когда серологические исследования результата не дают. При первичном сифилисе точность результатов достигает 95%. Также ПЦР эффективен для выявления врожденного сифилиса, нейросифилиса и сифилиса у ВИЧ-инфицированных. Для анализа берется соскоб из урогенитального тракта или секрет простаты, цена - 290 рублей. Подробнее про анализ на сифилис по ссылке .

Цена ПЦР уреаплазма

Цена ПЦР цитомегаловирус

Цитомегаловирус - заболевание достаточно распространенное, но знают о нем не многие. При хорошей иммунной системе вирус не оказывает никакого негативного воздействия на организм человека, оставаясь латентным на протяжении всей жизни человека. Симптомы могут появиться у людей с ослабленной иммунной системой (ВИЧ, псориаз, пересадка органов и др.). Понятия «иммунитет к ЦТМ» не существует, поэтому ПЦР на цитомегаловирус стоит сдать людям, относящимся к группе риска. Также надо сделать такой анализ тем, кто готовится к зачатию ребенка и беременным женщинам.

Все выше перечисленные анализы на половые инфекции Вы можете сделать в клинике «Благое дело». Экспресс анализы на венерические заболевания выполняются в течение одного-двух рабочих дней.

ПЦР диагностика позволяет выявить и другие инфекционные заболевания.

ПЦР на гепатит С

Цена ПЦР кандиды

В нашей клинике ведут прием врачи с многолетним стажем работы. Врач уролог, дерматолог, венеролог, гинеколог и др. окажут квалифицированную помощь, гарантируя анонимность и конфиденциальность.

Любые анализы на половые инфекции выполняются за короткий срок, с низкими ценами и гарантией качества - это клиника «Благое дело»!

Мы делаем все, чтобы диагностика и лечение в нашей клинике было доступным и комфортным!

С Вами будет работать врач уролог-венеролог

Ординатура - по специальности «Дерматовенерология» на базе РМАПО им. Сеченова 1996-1999гг. Аспирантура - НИИ Дерматовенерологии г. Москва 1999г-2002г.

Повышение квалификации по специальности «Урология» на базе НИИ «Урологии» г. Москва, ММСИ на базе ГКБ№50 2002, 2003, 2004, 2005г.

Специализация:
- дерматология-венерология;
- урология;
- андрология.

Стажировки за границей - Кафедра Дерматовенерологии Берлинского медицинского института. 2009, 2011г.

Регулярное участие в профессиональных конференциях, симпозиумах, круглых столах. Член Ассоциации российских урологов.

ПЦР — диагностика инфекций, современный и высокоточный способ выявления различных инфекционных заболеваний. Чем же он отличается от других анализов?

Расшифровывается эта аббревиатура как «полимеразная цепная реакция». Ее, как гласит Википедия, изобрел в 1983 году Кэри Мюллис, американский ученый. За свое открытие он получил Нобелевскую премию.

Некоторое время ПЦР использовали лишь в научных целях, после ее успешно заимствовала медицина. Суть исследования заключается в распознавании возбудителя инфекции на уровне ДНК и РНК. Каждый возбудитель, внедряясь в ДНК, изменяет его структуру по определенному типу. Именно по виду измененной ДНК лаборанту становится ясно, какое заболевание прячется в организме человека. Среди остальных преимуществ ПЦР:

1. Выявление первопричины инфекции, оставившей «следы» в ДНК. При сочетании нескольких болезней выявить то, с которого все началось, трудно. А для правильной постановки диагноза и подбора эффективного лечения, цепная реакция имеет колоссальное значение;
2. Устанавливается на ПЦР не только измененная ДНК, но и конкретный участок трансформации. Это необходимо для исключения сомнений по поводу ложных инфекций;
3. ПЦР-диагностика настолько чувствительна, что обнаруживает даже единичные бактерии и вирусы. Они могут оставаться в крови после неправильно назначенного лечения или незапланированного прерывания приема лекарств. Минимально диагностируемое количество при расшифровке ПЦР — 10 клеток-возбудителей. Другие методики тестирования не столь действенны;
4. Патогенные микроорганизмы обнаруживаются даже при отсутствии выраженных симптомов ЗППП. Обнаруженное на раннем этапе такое заболевание лечится не так длительно, как запущенные его формы;
5. Результаты ПЦР больной получает на руки довольно быстро. На диагностику инфекций уходит не более 4-6 часов. Вкупе с расшифровкой весь процесс отнимает не более 1-2 дней;
6. Взятого единожды ДНК-материала хватает для проведения 5-6 проб. Больному не придется сдавать мазки несколько раз;
7. ПЦР и исследование инфекций не стоит на месте, данная сфера постоянно развивается. Изобретаются новые тест-системы повышенной чувствительности, снижается стоимость проведения исследования. Если раньше оно было доступно только жителям мегаполисов, то теперь без него не мыслят определение болезни врачи стационарных поликлиник в регионах.

Особенности метода ПЦР:

1. Точность (ошибки минимальны и частота их не превышает 0,01%);
2. Чувствительность (тест «вычисляет» единичные бактерии в крови и мазках);
3. Специфичность (ПЦР выявляет инфекции, часто вовсе не проявляющие себя до тяжелой стадии);
4. Уникальность (анализы результативны в ситуациях, когда другие исследования ничего не обнаруживают).

Результаты анализа ПЦР

Как работает метод цепная реакция, как подготовиться к анализу?

Цепная реакция в лабораторных условиях предполагает многократное размножение разных участков ДНК и РНК с целью нахождения того самого нарушенного звена. Амплифицируются (удваиваются) кислоты при помощи ферментных препаратов. Используя ферменты, лаборант получает достаточное число копий патогенного участка ДНК для сравнения ПЦР его с образцами тех или иных болезней, спровоцированных инфекцией.

Как правило, используются биологические материалы, взятые путем забора или мазка. Для идентификации (расшифровка венерических инфекций) на ПЦР берется мазок из влагалища, шейки матки или мочеиспускательного канала. Иногда используется также моча.

Чтобы подтвердить или опровергнуть наличие гепатита, токсоплазмоза или ВИЧ, берут кровь из вены. Кровь, забранная из пальца, часто дает ложноотрицательные результаты. Мононуклеоз диагностируют после сбора материала ил зева. Туберкулез можно выявить после сбора мокроты, которая обильно выделяется у больных в утренние часы.

Мазок из влагалища и шейки матки на ПЦР — простой анализ, пугаться которого не стоит. За 2-3 дня до его проведения нужно отказаться от половой жизни. В течение этого же времени запрещается использовать для личной гигиены гели и мыло на щелочной основе. Подмываться можно обычной теплой водой из-под крана. Последнее подмывание — вечером перед утренним посещением лаборатории или врачебного кабинета.

Лечение молочницы с помощью кремов, мазей, свечей или спреев, если оно проводится, тоже желательно прекратить. Мазок сдается в первые несколько суток после менструации или сразу после нее. Для получения более точных результатов рекомендуется не посещать туалет 2-3 часа перед забором мазка ПЦР.

У мужчин на цепную реакцию берут мазок из уретры. Биологический материал забирают с помощью стерильного зонда или ватного тампона, вводимого в мочеиспускательный канал. Во время процедуры может появиться небольшой дискомфорт или чувство жжения. Мужчинам тоже придется временно отказаться от секса и средств гигиены. За неделю до анализа прекращается лечение антибиотиками и другими препаратами. Если дискомфорт после забора сохраняется, рекомендуется скорее обратиться в поликлинику.

Допустим, в исследовании используется кровь или мазок, взятый из половых органов пациента. Генетический материал помещается в прибор-амплификатор для ПЦР, туда же добавляются ферменты. ДНК нагревается до 90-95°С до разрушения цепочки на несколько звеньев. Этот процесс называется денатурацией. Во время работы реактора из одного образца ДНК и РНК создаются тысячи пригодных для анализа (расшифровка реакции) результата его копий.

Результаты диагностики ПЦР

Цепная реакция показывает не только наличие инфекции, но и точное количество имеющихся возбудителей. Разработка последних лет — искусственное введение мутационных генов в ДНК человека с целью выявления предрасположенности к изменению генотипа.

Что выявляет диагностика инфекций ПЦР?

Расшифровка результатов анализа обычно просматривается отдельно лечащим врачом. Возможности цепной реакции позволяют подтвердить или опровергнуть наличие следующих болезней:

Как ясно из этого списка, ПЦР диагностика дарит врачам многих узконаправленных специальностей неограниченные возможности. Применять метод можно в пульмонологии, вирусологии, инфекциологии, онкологии, гастроэнтерологии, гематологии, гинекологии и урологии.

ПЦР расшифровка: результаты

Анализы цепной реакции оцениваются только врачами индивидуально для каждого пациента с учетом имеющихся патологий и хронических болезней. Результаты анализов ПЦР указывают, как уже сказано выше, на количественные характеристики патогенных бактерий. Сверяясь с ними, врач установит степень тяжести и стадию заболевания. Исходя из этих показателей, в дальнейшем назначается дозировка препаратов и длительность курса приема.

Отрицательный результат ПЦР означает, что в забранном биологическом материале отсутствуют проявления каких-либо вирусов и инфекций. Положительный ПЦР — сигнал к тревоге. Значит, в крови и других биологических жидкостях пациента обнаружена инфекция.

Если значения минимальные, это может свидетельствовать о простом носительстве болезни, а не только об активном развитии заболевания. Простой переносчик инфекции, обнаруженный только при ПЦР, но не выказывающий никаких других симптомов, должен постоянно наблюдаться у врача.

Важно не поддаваться панике и помнить о том, что большая часть известных науке вирусов поддается лечению антибактериальными препаратами. Подбирать их и заменять один другим при неэффективности может только квалифицированный специалист, имеющий опыт в лечении той или иной болезни.

Расшифровка ПЦР может быть проведена не только по требованию врача, но и по собственному волеизъявлению. Часто его делают женщины, планирующие в ближайшее время беременность, чтобы убедиться в отсутствии венерических заболеваний. При постановке на учет в районной консультации у беременной все равно возникнет необходимость в прохождении этого типа диагностики.

Назначают ПЦР в обязательном порядке женщинам, имевшим несколько абортов или выкидышей по разным причинам. Перед ЭКО проводят анализ для устранения всех причин возможного отторжения плодного яйца.

Мужчины склонны проводить ПЦР после отпуска, во время которого имел место курортный роман или даже несколько. Диагностика помогает им не ставить под угрозу свою жизнь и здоровье потенциальных сексуальных партнерш.

Часто ПЦР становится единственным шансом для пациента избавиться от болезни на начальном этапе, когда ничтожен риск осложнений и тяжелого течения.

Похожие статьи